实验目的掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理 实验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。实验原理制备方法包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象 实验用品 ATCC细胞小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子 玻璃吸管 10ml刻度的离心管 离心机 载玻片 盖玻片 显微镜 滤纸 擦镜纸 纱布 恒温水浴锅 3．药品：0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1） 2%柠檬酸钠 改良石炭酸品红实验步骤预处理→取股骨→冲洗骨髓→离心→低渗→离心→固定→离心→滴片→染色→观察 1．预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。 2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取 10ml 2%柠檬酸钠，注射 器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心： 1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中 6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻 轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次实验步骤8. 离心： 1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干 ATCC细胞小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察 10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观察：低倍———高倍